分光光度计工作原理及测定方法

分光光度计工作原理

    分光光度计测量根据朗伯一比耳定律A=KCL,其中A为吸光度,K为吸光系数,C为溶液浓度,L为液层厚度。虽然,分光光度计是比较精密的仪器,但它不可能无限地符合朗伯一比耳定律。仪器的灵敏度不同,它所检测溶液浓度的范围也不同。当检测物质的浓度较高时,将会对单色光产生大量的吸收,使达到检测器的能量较弱,超出仪器的检测的范围。同样,当被测物质很稀时,溶液对单色光的吸收很少,因而,达到检测器的光的能量较高,从而使检测器处于临界饱和状态下工作,在这些情况下,仪器对样品的检测将会发生严重的失真。所以每台仪器都有一定的测量范围,都有一定的灵敏度。

    朗伯一比耳定律是对单色光而言,但实际上,目前各种分光光度计分光后所得到的光,一般都是复合光,即或多或少含有在工作波长附近的杂散光,同样,单色器的出射狭缝总有一定的宽度,出射的光一般都是一个波段的光,这些杂散光会引起朗伯一比耳定律的偏离。检测方法是利用一些溶液只对某一波长的光有较强的吸收,而对其附近波长的光不吸收,当仪器在此波长下测量很浓的这些样品,其透过率应为零,但由于有杂散光的存在,其读数不一定为零。

分光光度计测定方法

测定灵敏度时,采用如下的指标:

   (1)在波长440nm处测量浓度为30ppm与32.5ppm的K2Cr2O7的H2SO4溶液(以0.1NH2SO4溶液为空白),其吸光度A之差应不小于0.01A。

   (2)在波长为510nm处,测量浓度为2000ppm与2150ppm的CoCl2的HCl溶液(以0.1N的HCl溶液为空白),其吸光度A之差应不小于0.01A。

   (3)在波长为690nm处,测量浓度为2000ppm与2150ppm的CuSO4的H2SO4溶液(用0.1N的H2SO4溶液为空白),其吸光度A之差应不小于0.01A。

测定杂散光时、采用如下的指标:

    (1)对于可见光分光光度计,用蒸馏水作参比,在620nm处,用10mm石英比色皿,测量0.005%的亚甲蓝,其透过率应小于1%。

    (2)对于紫外分光光度计:

   (a)用10mm石英比色皿,用蒸馏水作参比,在310nm处,测量分析纯丙酮,其透过率应小1%。

   (b)用10mm石英比色皿,用蒸馏水作参比,在210nm处,测量0.1mol/L的NaBr溶液,其透过率应小于1%。