造血祖细胞的概念是1978年由美国、加温度越高则溶解度越低。所以在室温条件己经拿大等门个国家的实验血液学家提出,调节过的液体培养基放到37aC的培养箱里,继之造血祖细胞的培养技术pH值可随温度升高而升高,其升高的程度与也得到广泛的应用。目前,应用细胞培养技术气相液相的比例有关,经验值为0.Zto.4之间。已成为许多科研工作的手段和基础。造血祖细胞的培养离不开二氧化碳培养箱的应用,HH.CP-T(80升)二氧化碳培养箱是上海岛韩实业有限公司生产的，其对造血祖细胞培养的影响有许多方面, 主要有以下几点。 一、二氧化碳(C 0 2)浓度细胞生存、代谢、增殖、分化于培养体系中, 首先需要稳定的pH环境, 目前, 造血祖细胞培养体系的p H 多用二氧化碳一碳酸氢钠(C 0 2 一N aH C 0 3)缓冲液系统控制[2] , 如果c o Z 浓度保持恒定, 则pH 值与N aH C O 3 浓度的对数成比例,N 州C O 3 量增加10倍, 则pH 值上升1.0 ; N aH CO3 量减至1/2 ,则pH 值下降0.3。在二氧化碳培养箱的密闭体系中, 培养液中的pH 变化受下列因素影响:1 液相中的N aH CO 3 浓度; o气相中的C O Z ;? 气相与液相两者容积的比例; ? 细胞数及使用细胞种类的乳酸的产生量。 C O : 气体对液体的溶解度与温度有影响,温度越高则溶解度越低。所以在室温条件己经调节过的液体培养基放到37 ℃ 的培养箱里, 其pH 值可随温度升高而升高, 其升高的程度与气相液相的比例有关, 经验值为0. 2刁.4 之间。如果培养箱内植入培养的细胞, 由于细胞呼吸产生c o Z , 糖分解后产生乳酸, 在产生1m ol的乳酸的同时, 乳酸作用于液相中的N aH c O 。,则发生lm ol 量的c o Z , c o : 发生后立即移行于气相中, 此时N aH C O 3 即产生缓冲作用, 如果细胞数太多, 产生乳酸量超过N aH C O 3 的中和能力, 则液相的pH 下降。 培养体系中造血细胞浓度较低, 由于细胞二、湿度造血祖细胞*的生长湿度是10 % , 如果能保持c o : 培养箱内的水分, 一般均能维持造血祖细胞生长所需的湿度, 如果C O : 培养箱内的水分蒸发消耗掉, 造血祖细胞的生长会停止或死亡, 因此, 应定期检查C O Z培养箱内的水分, 及时补充。 二、温度*的温度是37 ℃ , 适宜的温度是造血祖细胞生长所必需的, 温度过高过低会直接影响造血祖细胞的生长, 另外, 温度也影响C O : 的在液体的溶解度, 温度越高, 则溶解度降低, 通过pH 值的波动来影响造血祖细胞的生长。 讨论 影响体外造血祖细胞生长的因素很多, 例如细胞种类、培养基、培养器械、分化诱导因子等Izj , 就c o : 培养箱而言, 主要的是以上提及的3 个因素, 其中湿度和温度较稳定, 发生故障的机会不多, 而影响C q 浓度的因素较多, 因此, 多数c o : 培养箱的毛病出在此参数。的代谢产物不致使培养体系中的pH 发生巨大的变化, 用c O Z一N aH c o 3 缓冲体系足以控制其p H , 若培养液内11. 6 m m o 比浓度的N 州C O 3 ,则*的C O : 浓度是5% , 可使pH 经常保持在7. 3 左右, 一般pH 低于7. 0 则细胞的代谢活性低下。如果C O : 浓度显示达不到5% 时, 首先检查C O : 气罐是否有气体, 如果没有, 应马上予以更换;其次是C O : 入口及其通道是否阻塞, 这些部位往往是较易发生故障和难于发现的, zui简单的检查和修理方法是用lo ml 的注射器来回抽吸或灌气, 对于轻度堵塞可以解决问题。另外的原因是控制C O : 的微处理器出毛病, 出现这种情况时需请专业人员进行修理。 还有一种情况也是在实际工作中经常见到的,就是C O : 培养箱的C O : 浓度数字已显示己达5% , 但培养基仍不能维持理想的pH 值, 究其原因可能有以下几点: 1 c o : 培养箱的c o : 浓度数字与实际的c o : 浓度不符; oc o : 培养箱门未关闭好; C O : 培养箱开门次数过多, C q浓度难于达到造血祖细胞的培养要求。 |
