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实验室培育细胞如何无菌操作?
点击次数:2704 更新时间:2012-05-04

实验室培育细胞如何无菌操作?

实验室前期的准备工作一定要到位,先估计此次试验过程中会使用到那些设备或者仪器,避免因估计不足、准备不充分而导致试验不能继续完整下去。

 

1. 无菌操作办公地区范围应维持保洁及宽阔,*东西,例如玻璃管架、吸管、汲取器或吸管盒等可以短时间之内安放,其他实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。实验用品以70  ethanol 揩拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面的中央无菌地区范围,勿在边缘的非无菌地区范围培养箱KLYQ操作。

2. 实验施行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯映射30-60 分钟灭菌,以70  ethanol 揩拭无菌操作台面,并开启无菌操作飓风扇运转10 分钟后,才着手实验操作。每每操作只处置一株细胞株,且纵然营养物质相同亦不共享营养物质,以防止差错淆惑或细胞间污染。实验完结后,将实验东西带出办公台,以70  ethanol 揩拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,运用霉菌培养箱二氧化碳培养箱再施行下一个细胞株的操作。

3. 谨慎取用无菌的实验东西,防止导致污染。勿碰触吸管尖头部或器皿瓶口,亦不要在敞开的器皿正上方操作实验。器皿敞开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾侧约45° 角取用,尽力勿将瓶盖盖口朝上安放桌面儿。

4. 办公担任职务的人应注意自身的安全,须穿戴实验衣及手套儿后才施行实验。对于来自人的总称或是病毒感染的细胞株应尤其谨慎操作,并挑选合适等级的无菌操作台至少Class II)。操作过程中,应防止引动aerosol 的萌生,谨慎毒性药品,例如DMSO TPA 等,并防止尖锐针头的损害等。

5. 定期检验测定下面所开列项目:

a. CO2 钢瓶的CO2 压力

b.  二氧化碳培养箱CO2 液体浓度、温度、及水盘是否有污染水盘的水用无菌水,每周改易

c. 无菌操作台内的airflow 压力,定期改易太阳灯管及HEPA 过淋膜,预滤网(300钟头/预滤网,3000 钟头/HEPA)



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