良好的微生物实验室操作规范USP药典《1117》章节 简介 在微生物实验室中，良好的实验室操作规范是基于很多原则，包括以下活动：无菌技术、培养基的控制、菌种的制备、仪器设备的管理、细致的记录和数据的评估、人员的培训。*，微生物测定数据的可变性、可靠性和重现性是基于*方法的使用和坚持良好的实验室操作规范。 培养基的制备和质量控制－培养基的制备 培养基是微生物测定的基础，培养基的质量因而成了保证微生物实验成功的关键。培养基的制备、合理的贮存、培养基的质量检验，能确保提供持续高质量的培养基。在按照可接受的来源和标准中的配方制备培养基的过程中，重要的是选择正确的培养基和成分。与脱水和制备好的培养基一起的还常常伴有供应商的配方和说明。因为不同的培养基可能有不同的制备要求（如：加热、填加物、 ph值的调节等），按照说明确保制备可接受的培养基是重要的。一份描述效期和建议贮存条件的COA是同制备好的培养基一起的，同时附有用于培养基的促生长试验和灵敏度测试的菌种。 水普遍用于微生物培养基的稀释。纯化水是zui常用的，但是在有些情况下，也用去离子水和蒸馏水。稀释用水的体积应该记录。 使用脱水培养基和培养基组分来制备培养基时要准确称量。使用己校正的具有适合的称量范围的天平。使用清洁的容器和工具，防止配方中带入外来物质，改变培养基的zui终组成。称量也应该记录。 脱水培养基先在水中分散，并*溶解和灭菌。如果必要可以加热使溶解,但要防止过度加热，因为所有的培养基或多或少有对热敏感的。用于培养基制备的设备应适于加热控制，持续搅拌，溶质混合。培养基变黑（梅特拉反应和非酶的棕色着色剂）通常显示过度加热。当需要向培养基中添加补充物时，添加后应充分混合。 制备好的培养基应放在清洁无菌的玻璃器具中，也可以加入抑制性物质。抑制性物质可以由器具清洁时产生也可由先前贮存在此器具的物质产生。必须确保清洁过程能有效去除残留和异物，确保清洁剂用纯化水充分清洗。参见《1051玻璃器具的清洗》。 培养基的灭菌应根据供应商提供的参数或用户自己的验证。买来的制备好的培养基应提供其使用的灭菌方法的文件。理想的供应商应提供培养基的灭菌保证水平（SAL），此水平是依靠*的生物指示剂确定的。湿热高压灭菌是的灭菌技术，除了一些为避免培养基中的热敏物质遭到破坏而采用的煮沸方法。通过过滤灭菌对有些配方也是合适的。 培养基的灭菌方法、灭菌条件的效果应通过培养基的灭菌和促生长试验来验证。另外，如果通过湿热灭菌，灭菌周期应经过验证，对选择合适的负载和体积来确保合适的热分布。通常供应商建议采用一个已校正过的灭菌高压锅，在121°灭菌15分钟。通常指培养基达到温度的时间。当灭菌锅负载结构影响加热的速度是时，越多的负载就需要越长的灭菌周期。然而，灭菌的时间取决于培养基的体积和高压锅的负载。灭菌周期中，当温度是慢慢上升时，可能导致培养基的过度加热。因此，必须仔细确认能达到zui小的SAL要求的灭菌周期，在过度加热时，抑制培养基降解的趋势。在流体循环完成后，不主张放冷后的培养基中放在灭菌锅中贮存，因为这样可能破坏培养基。不合适的加热或灭菌（对买来的培养基或是内部制备的培养基）可能导致颜色的不同变化，不透明，改变培养基的规格，或是PH发生漂移（与供应商的提议范围）。 通过无菌技术为测试制备的每一批培养基其PH在放冷至室温（25°）后，都应测定。一个扁平的pH计用于培养基表面pH值的测定，浸入式的pH计用于液体的测定。各供应商提供的培养基的pH应该在规定的±0.2的范围内，除非通过验证得到更宽的范围。上海岛韩实业有限公司是实验室仪器设备的专业供应商。上海培养箱，恒温培养箱，生化培养箱 制备培养基应对培养皿和试管进行适当如下的检查： 有裂纹的容器和盖子； 容器内不同的填充体积； 有裂纹容器内可导致脱水的结果或是固体培养基表面起皱； 溶血； 额外黑或颜色改变； 可能过冷引起的结晶； 过量的气泡； 微生物的污染； 氧化显示的情况； 批号、效期的检查和记录； 培养基的灭菌。 培养基的贮存 在培养基销售给zui终的使用者之前，供应商和生产商是如何运输和贮存培养基应谨慎考虑。生产商在运输和贮存培养基时，应使用那些能尽可能减少失水，温度控制，机械保护装置的条件。 培养基的标识应包括批号、制备，有效期和证书。培养基应根据供应商的说明书贮存。实验室制备的培养基应根据验证的条件贮存。不能将培养基贮存在零度以下，因为太冷的条件下会破坏培养基的结构。保护培养基避免在光照和过高的温度下保存。培养基若要延长贮存，应将培养皿放在密封包装或容器中避免水分流失。 制备的固体培养基在初始容器中的再熔化，只能熔化一次，避免因过度加热和潜在污染影响培养基的质量。推荐采用加热水浴或蒸气加热来熔化培养基。微波炉和加热板经常使用，但是要小心，避免过度加热破坏培养基，避免实验室人员受到玻璃的碎片和烧伤的危险。熔化的培养基应在45°至50°保存不超过8小时。当从浸在水浴中的培养基容器中倾倒时，要小心操作防止水浴产生的水与己灭菌的培养基混合。在倾倒前将容器外表面擦干是明智的。 |
