分光光度计的线性校正 光度线性是指仪器光度测量系统对于照射到接收器上的光辐射功率与系统的测定值之间符合线性关系的程度。光度线性越好,表示光度准确性越高,也就是表明仪器能按准确的比例反映入射辐射的变化。在分光光度计中测得的光度数据都是一个相对值;它都是相对于100%或0%而言的,而100%和0%是自由设定的。如果一个光度系统的响应在0～100%范围内是线性的,即可测得准确的光度值。由于分光光度计中探测器、电子线路、显示器等非线性因素的影响,整个系统的光度线性必须加以校正,才能获得准确的测定值。检查光度线性的方法有平方比律法、比尔衰减率法、偏振器法、滤光器或滤光器组合法和旋转扇形板法等。上述方法中,其测量结果有的与制备技术有关,有的与传递基准有关。采用光叠加法可以避免仪器之间的传递误差,也与样品的制备无关,并可用于整个光度范围内,它是一种以物理原理为基础的测定方法。 提高线性校正准确度的措施 如果接收器的特性曲线不是一个光滑而有规则的曲线,在2∶1测量点的间隙中,就可能产生错误,特别是在100%～50%这一段,间隔大,测定点小。为了弥补这个缺点,可以采用第二个2∶1的系列,例如以70%为起点,按照上面的方法逐点测出修正系数。当要求系统的线性得到更高精度的修正时,还可以建立第三个2∶1的系列,例如以85%为起点等。 线性校正中,需要把第二、第三等系列的数值补充到*系列中去,如图4所示。Φn系列是将曲线校正到OB线上的修正系数,要校正到OA直线上,需求出各系列之间的关系。当*系列测试完毕后,曲线L上的1、2、3、A点等已知了。选择某一系列的zui大值I(Φn)由△OAΦ0和△OCΦn可计算出CΦn,修正量Δ0=I(Φn)-CΦn,其中I(Φn)为实测值,CΦn为插值后计算得到。对应的修正系数为e0=Δ0/I(Φn)。经过推导,可知在各系列修正系数的基础上,再加上各系列zui大值的修正系数e0,即可将各系列的修正系数补充到*系列中去了。 |
